分光光度計的原理

分光光度計，又稱光譜儀(spectrometer)，是將成分復(fù)雜的光，分解為光譜線的科學(xué)儀器。測量范圍般包括波長范圍為380~780 nm的可見光區(qū)和波長范圍為200~380 nm的紫外光區(qū)。不同的光源都有其*的發(fā)射光譜,因此可采用不同的發(fā)光體作為儀器的光源。鎢燈的發(fā)射光譜:鎢燈光源所發(fā)出的380~780nm波長的光譜光通過三棱鏡折射后，可得到由紅、橙、黃、綠、藍(lán)、靛、紫組成的連續(xù)色譜;該色譜可作為可見光分光光度計的光源。

光譜范圍

包括波長范圍為400~760 nm的可見光區(qū)和波長范圍為200~400 nm的紫外光區(qū).不同的光源都有其*的發(fā)射光譜,因此可采用不同的發(fā)光體作為儀器的光源。

鎢燈的發(fā)射光譜:鎢燈光源所發(fā)出的400~760nm波長的光譜光通過三棱鏡折射后,可得到由紅橙,黃綠,藍(lán)靛,紫組成的連續(xù)色譜;該色譜可作為可見光分光光度計的光源。

氫燈(或氘燈)的發(fā)射光譜:氫燈能發(fā)出185~400 nm波長的光譜可作為紫外光光度計的光源。

物質(zhì)的吸收光譜

如果在光源和棱鏡之間放上某種物質(zhì)的溶液,此時在屏上所顯示的光譜已不再是光源的光譜,它出現(xiàn)了幾條暗線,即光源發(fā)射光譜中某些波長的光因溶液吸收而消失,這種被溶液吸收后的光譜稱為該溶液的吸收光譜。

不同物質(zhì)的吸收光譜是不同的.因此根據(jù)吸收光譜,可以鑒別溶液中所含的物質(zhì)。

物質(zhì)的吸收光譜

當(dāng)光線通過某種物質(zhì)的溶液時透過的光的強度減弱.因為有分光在溶液的表面反射或分散,分光被組成此溶液的物質(zhì)所吸收只有分光可透過溶液。

入射光= 反射光 + 分散光 + 吸收光 + 透過光。

如果我們用蒸餾水(或組成此溶液的溶劑)作為"空白"去校正反射,分散等因素成的入射光的損失則:

入射光 = 吸收光 十 透過光

原理

分光光度計采用個可以產(chǎn)生多個波長的光源，通過系列分光裝置，從而產(chǎn)生特定波長的光源，光線透過測試的樣品后，分光線被吸收，計算樣品的吸光值，從而轉(zhuǎn)化成樣品的濃度。樣品的吸光值與樣品的濃度成正比。

單色光輻射穿過被測物質(zhì)溶液時，被該物質(zhì)吸收的量與該物質(zhì)的濃度和液層的厚度(光路長度)成正比，其關(guān)系如下式:

A=-lg(I/I。)=-lgT=kLc

式中 :A 為吸光度;

I。為入射的單色光強度;

I 為透射的單色光強度;

T 為物質(zhì)的透射率;

k 為摩爾吸收系數(shù);

L 為被分析物質(zhì)的光程，即比色皿的邊長;

c 為物質(zhì)的濃度;